本发明公开了一种注射用两性霉素B脂质复合物，它包括两性霉素B、胆固醇硫酸盐和磷脂，两性霉素B、胆固醇硫酸盐和磷脂的摩尔比为1∶0.5～10∶0.3～10。本发明还公开了上述注射用两性霉素B脂质复合物的制备方法。本发明的注射用两性霉素B脂质复合物的复合率≥95％，且粒径较小，平均粒径≤100nm，复溶后的粒径为50～250nm。本发明的两性霉素B脂质复合物在生理盐水及血浆中稳定，因此毒性及输液反应较低，可以采用生理盐水稀释，也提高了临床使用范围及方便性。本发明的两性霉素B脂质复合物的制备方法，工艺简单，便于大生产。